开展分子生物学实验, 于跑胶检测DNA或者RNA之际, 挑选适宜的核酸染料是极其关键的。此情形与显影效果紧密关联, 和灵敏度也有关系, 并且对实验人员的安全而言也是如此。当下市场上品种多样, 从经典的EB直至各类新型荧光染料, 它们各自都存在优点与缺点。知晓它们的特性, 可以助力我们规避诸多问题, 进而提升工作效率。
为什么大家都说EB有毒却还在用
一种曾占据核酸染料绝对主导地位的物质, 叫做溴化乙锭（Ethidium Bromide, EB）, 它有着结构简易的特性, 能够嵌入到DNA双螺旋碱基对的中间位置, 于紫外光的照射之下, 发出橙红色的荧光, 它具备的优势极为显著, 那就是价格低廉、灵敏度超高、技术十分成熟, 差不多所有老一代的科研人员都对它熟知。
然而,EB的毒性问题是不能被轻易忽视轻视的核酸染料都有哪些, 它属于一种强诱变剂了, 它能够插入DNA最终致使基因突变。在实施操作的时候是需要极其严格苛刻的防护措施的, 废液处理同样是格外繁杂麻烦的。正是基于这样的情形, 即便它的性能表现稳定, 可是在现代实验室当中, 它的使用频率正处于逐渐下降降低的状态, 特别是在那些关注重视生物安全的机构里边已经被限制进行使用了。
替代EB的主流安全染料有哪些
科学家开发了好些安全性更高的染料, 目的是为了去替代EB , GelRed和GelGreen在这些染料里头是比较出色的 , 它们属于大分子化合物 , 没办法穿透细胞膜 , 所以被看作是没有诱变性的 ,更为安全。
GelRed的灵敏度是极其高的。它甚至比方EB情况还要好。同时它跟DNA结合紧密性是很强的。不容易被洗脱。它在蓝光透射仪这样的仪器之下能够良好地显影。减少了紫外光对于DNA的损伤这种情况。GelGreen却不一样儿。它经常被利用于琼脂糖凝胶电泳之后的染色。也能够就用于PCR反应体系里的实时监测的这件事上。它进行采用的时候展现出来了更强的灵活性。
名为Sybr Safe的核酸染料都有哪些, 是另外一款常见的替代品, 它对于DNA的损伤比较小, 适宜随后需要将DNA片段回收的实验, 虽说灵敏度略微比GelRed差一些, 不过它的安全性良好, 并且背景噪音低, 显影清晰, 是好多常规实验的首先抉择的东西。
特殊场景下的专用染料选择
除了通用型的染料之外, 还有一些是针对特定需求而存在的专用染料, 比如, 用于聚丙烯酰胺凝胶电泳也就是PAGE的染料, 像SYBR Gold这种, 它具备极高的灵敏度这样的特性, 能够检测到处于皮克级别的核酸。
针对RNA实验, 鉴于RNA易于降解, 一般而言需要更为温和的染色方式。存在一些染料, 在染色进程中不会对RNA结构造成破坏, 或者能够支持原位杂交之后的检测。挑选适宜的染料, 还得考量成像设备的光源匹配程度, 以此保证荧光信号实现最大化。
