致力于分子诊断以及科研工作的人, 最为惧怕的便是同位素操作具备麻烦的特性并且是有害的。非放射性核酸探针成为了主流的选择对象,原因在于它具备安全的特质、稳定的特性非放射性核酸探针, 还能够进行重复检测操作。众多的人处于纠结的状态之中, 纠结的内容是哪一种标记方法是最为优良的, 实际上关键之处在于要看你的实验目的以及应用场景情况。
非放射性核酸探针有哪些常见标记方法
用得最多的方案之中, 目前实验室采用的是地高辛标记。它的抗体显色系统成熟度极高, 灵敏度之高足以应对大部分常规PCR的实验以及杂交实验。尽管步骤稍微多了些许, 存在封闭以及孵育的情况, 但对于基层实验室而言, 成本是可控的并且结果可靠, 是这样的关系。
从事高通量筛选工作, 生物素标记会更适宜。它能够借助链霉亲和素 - 生物素系统来实现信号放大,其灵敏度常常比地高辛还要高些。当存在检测微量靶标的需求时非放射性核酸探针, 这种放大效应能够明显降低假阴性出现的风险, 对于临床样本里低丰度基因的筛查尤为合适。
实时监测的首选是荧光标记, 它不像化学发光那般需等待显色, 在PCR过程里它便可实时反馈数据, 这为渴望观察扩增动力学曲线的研究人员, 提供了直观的带时间维度的数据, 致使实验过程更为透明且可控。
如何选择适合你的非放射性探针
勿盲目去追求那最高灵敏度, 有时过度灵敏反倒会致使增加背景噪音。要是你的样本质量呈现出参差不齐的状态, 建议优先去选择特异性更为强一些的地高辛体系。它对于环境干扰所具备的耐受度是比较高的, 能够在复杂基质当中维持较好的信噪比。
在追求快速得出结果的临床那种场景之中, 荧光探针的确无疑就是最佳搭档。荧光探针它可以将检测时间缩短超过一半, 并且自动化程度是很高的, 减少了人为操作所产生的误差。对于荧光探针来说, 虽然单次试剂成本稍微高一丢丢, 但是综合人力以及时间这方面的成本来进行考虑的情形之下, 效率提高所带来的价值远远超过价格之间的差异。
实验记录若要长期保存, 需考虑后续数据处理需求, 其中化学发光或比色法的固相膜结果更便于归档, 然而荧光数据却需要专门软件支持以及分析流程来处理, 这无疑对实验室的信息基础设施提出了更严苛要求, 所以在选型的时候必须提前做好规划落实下来。
