于分子生物学实验里, 核酸电泳是用以检测DNA或者RNA片段大小以及纯度的基础方式。好多初学者在这一步极易遭遇问题, 要么条带呈现模糊状态, 要么出现拖尾现象, 甚至根本看不到结果。实际上, 只要对缓冲液配制严格加以把控, 以及关注点样技巧和电泳参数, 便能够大幅度提升实验成功率。正确的操作方面的细节常常比价格昂贵的试剂更具决定实验成败的作用。
凝胶制备与点样有哪些常见误区
众多人觉得配胶挺容易, 随意倒进去就成, 然而事实上气泡以及凝固均匀程度极为关键。倒胶之前一定要保证琼脂糖彻底溶解, 溶液清晰澄澈, 不然冷却之后会出现颗粒感, 对电场均匀性造成影响。添加核酸染料的时候要轻柔地搅拌均匀, 防止产生过多气泡, 一旦底部存有大气泡, 就得重新制作, 因为这些气泡会妨碍电流传导, 致使条带歪曲。
点样这个环节, 算得上重中之重的问题区域了。进行点样操作时, 枪头千万不能碰到孔壁, 不然就有可能划破胶面, 或者污染到相邻的孔道。加样的时候, 量一定要把控好, 多了会致使条带扩散, 少了又检测不出信号。点样之前，必须得通过离心把液体收集起来, 不然枪头尖端挂着的液滴到不了胶孔里。与此同时, 要把样品顺序标记清楚, 毕竟凝胶在电泳过程中, 有可能会出现位移, 标记要是乱了, 结果解读起来就会变得特别困难。
电泳条件设置与结果判读指南
分离效果受电压选择的直接影响, 低电压（5V/cm那一种）对大片段DNA的分辨有利, 不过耗时比较长, 高电压速度快, 可惜会产生大量焦耳热, 致使凝胶变形, 或者核酸变性, 通常建议电压控制在5至8V/cm, 还要密切观查缓冲液温度, 要是发热严重, 就得立刻停止电泳。
电泳完毕之后, 别着急去取出凝胶。先去观察在紫外透射仪之下的条带分布状况, 以此来判断是不是存在着非特异性扩增或者降解现象。在进行拍照记录之时, 要调整曝光的时间, 防止条带出现过曝从而失去细节方面的信息。针对于模糊不清楚的条带, 可以试着降低电压再次进行电泳, 或者是更换不同浓度的凝胶来予以优化。请记住, 每一回失败都是优化条件的一个契机, 借助对比不同参数之下的结果, 你能够更加深刻地领会核酸电泳的原理以及技巧。
