做分子生物学方面的实验, 核酸电泳几乎是每一步都必定要经过的关卡, 查看凝胶上显现清晰且明白的条带, 这个时候心里才会感觉到踏实, 可一旦出现的结果并不让人心满意足, 呈现拖尾、弥散、毫无声响、无息无形状况, 确实是特别令人头疼, 许多人认为这仅仅是运气坏了, 实际上背后是缓冲液、电压以及胶浓度这些隐蔽的细节在默默产生负面影响, 弄明白这些内容, 才能够从依靠运气碰运气转变成为稳定的、有一定准则和方法的操作。
为什么核酸电泳条带会拖尾模糊
出在核酸样品本身常常是拖尾现象最为常见的缘由。要是提取的DNA或者RNA纯度欠佳, 残留下去的蛋白质、盐离子以及有机溶剂, 均会对核酸于电场里的迁移形成干扰。尤其是RNA, 极为容易遭受RNase降解, 只要降解了, 原本尖锐的条带就会转变成一片模糊的云团。在这个时候, 哪怕电泳条件毫无瑕疵, 也是无法挽救回来的。
再一个关键要素是上样量, 好多新手因想看得明晰, 就不顾一切地增大样品的体积或者浓度, 过量的核酸会致使局部电荷密度过高, 进而产生“热效应”, 让胶孔周边温度上升，核酸会出现变性或者迁移不均衡的状况, 最终形成拖尾, 另外, 电泳缓冲液重复使用的次数过多, 离子强度发生改变, pH值出现漂移, 同样会使条带变得扭曲、模糊得看不出清晰模样。
如何优化核酸电泳获得清晰结果
想要得到清晰且锐利的条带, 第一步需确保样品质量, 对于DNA, 要尽量运用酚氯仿抽提或者专用试剂盒去除蛋白污染, 对于RNA, 要全程戴着手套, 使用无RNase的耗材, 并且在冰上展开操作, 上样之前, 一定要让样品与上样缓冲液充分混合均匀, 还要短暂离心收集管壁液体, 防止气泡产生干扰。
电泳进程之中的细节同样具备重要性, 电压不适宜过高, 通常建议为5 - 10V/cm, 高电压会生成大量热量, 致使胶体发生变形或者核酸遭到降解。要是属于琼脂糖凝胶, 配制之际要留意让琼脂糖进行完全融化, 冷却至60度上下之后再倾倒胶液, 规避气囊以及厚度不均衡的情况。点样之时, 针头不要戳破孔底, 轻轻放入样品, 防止样品扩散至相邻的泳道。借助这些细微的调整, 条带的清晰程度会有明显的提升。
