从事分子生物学实验时, 最怕碰到结果不尽如人意, 却寻觅不出缘由的状况。好多时候, 问题存在于那瓶看似平常的水上。无核酸酶的水并非仅仅是去除了离子，更为关键的是要将RNase和DNase这些顽固的“分子杀手”完全消灭。它们能够在刹那间降解你的RNA或DNA样本, 致使先前的努力付诸东流。对科研人员而言, 选对水就是守住实验质量的第一道防线, 这比任何价格高昂的试剂都更基础且重要。
为什么普通蒸馏水不行
好多新手会发问, 实验室经常储备的蒸馏水或者去离子水难道不可以使用吗? 其答案为否定的。平常的水处理流程没办法除掉核酸酶, 甚至 在水处理进程里, 设备自身的污染就有可能引进RNase。RNase极为稳定, 耐受高温、耐受酸碱, 一般的煮沸或者高压灭菌对它基本没效果。一旦它混入你的反应体系, 哪怕仅有几个分子, 也足够在几分钟内切断长链RNA。
和其他水相比, 无核酸酶的水经特别处理, 像超滤或者化学修饰, 专门针对核酸酶做了灭活或者去除。这种水常常含有经过焦碳酸二乙酯即DEPC处理的痕迹, 或者经由0.22微米滤膜过滤把大分子杂质除掉了。虽说成本稍微高些? 然而和重新制备样本的时间成本以及试剂消耗相比 , 这笔投入肯定是十分必要的。
选购与使用注意事项
于购买之际, 切莫仅聚焦品牌, 更应留意说明书里的标注。要保证产品清晰标明为“Nuclease-Free”或者“RNase/DNase Free”。某些价格低廉的产品或许只是声称“低核酸酶”, 而针对此这类产品而言, 在像qPCR或者NGS文库构建这般敏感的实验中, 是远远不足够的。进行分装保存乃是关键策略, 需规避因反复冻融致使包装遭受污染。于每次取用之时, 务必要采用无菌枪头, 且要在超净台中开展操作, 以此防止空气中的微粒落入瓶口。
留意水的pH值以及电导率指标, 对于某些酶促反应而言, 水的纯度会直接对酶的活性产生影响, 要是实验对金属离子敏感, 那么还得确认水有没有经过去离子处理, 记住, 无核酸酶的水属于一次性消耗品, 开封之后建议在一周之内用完, 并且始终放置在冰上或者4度的冰箱里保存, 以此来维持其稳定性。
