进行分子生物学实验时, 电泳构成了日常操作里的关键部分, 以前众人惯常运用EB, 然而鉴于毒性方面的问题, 实验室全都朝着更为安全的替代品转变, 绿色荧光染料因激发波长处于可见光范畴,对眼睛较为友好核酸染料 green, 并且灵敏度还不错, 从而成为众多实验室的优先选择, 不过市面上的产品繁多, 从SYBR系列直至新型染料, 价格差异显著, 性能同样各不相同, 选错了不但会造成经费的浪费, 还兴许会对实验结果的可重复性产生影响。诸多新手科研工作人员在进行采购的期间, 常常仅仅关注价格, 却将与DNA相结合的特异性以及背景噪音控制给忽视掉了, 进而致使跑胶之后条带呈现出模糊不清的状态或者背景变得过于深暗, 要知晓不同染料的特性, 并且结合实际实行的实验需求, 这样才能够做出明智的抉择。
绿色核酸染料安全性如何评估
传统EB致癌风险高, 操作繁杂需专用废液处理, 相比之下, 绿色染料常常被宣扬为无毒或是低毒, 然而这得辩证地去看待, 大多数绿色染料虽说并非强致癌物, 可是依旧存在潜在的致突变性, 不能够直接拿手去接触凝胶或者溶液, 真正的“安全”是说其代谢途径清晰、环境污染小,以及无需特别防护便能在普通实验室使用核酸染料 green, 部分新型染料甚至还能够直接添加到PCR体系里进行实时监测, 从而大幅削减了操作步骤以及暴露时间。做选择的期间当中, 一定要特意去查看由供应商专门予以提供的安全数据表, 仔细确认一下它是不是已经通过了相关的生物安全性认证, 千万不要为了贪图省事就轻易去忽视可能潜藏的长期健康方面的隐患。
绿色核酸染料灵敏度够用吗
具有能够检测到微量DNA片段之能力的灵敏度, 是直接相关的。众多绿色染料的灵敏度, 是接近甚至超越EB之处, 是能够清晰展示纳克级的DNA条带的。然而, 不同品牌于不同琼脂糖浓度之下的表现之事, 能潜在存在差异。有些染料在高浓度胶里的穿透力是欠足的, 致使深层条带的信号脆弱；另外一些情况则可能是对RNA产生交叉反应, 造成假阳性的状况。此外, 长时间的紫外照射有可能致使部分染料淬灭, 对成像效果予以影响。所以, 在正式实验之前, 建议开展小规模预实验, 拿不同染料在同一样品上的显色强度比对。不管是高通量筛选, 还是微量样本检测, 去挑选那种具备高亮度、低背景特性的染料极为关键, 如此一来能够大幅度提高数据可靠性。
