对于刚接触分子生物学的同学来讲, 做实验最怕的便是跑胶前功尽弃, 核酸电泳看上去简单, 实际上细节决定着成败, 很多人觉得把样品点进去按开始便可, 结果条带模糊、拖尾甚至全然看不见, 其实, 只要掌握了正确的操作流程以及关键注意事项，便能极大提高实验成功率, 这篇内容将会结合实际操作经验, 帮你理清思路, 规避常见误区。
核酸电泳步骤怎么做才规范
制备琼脂糖凝胶乃是电泳的根基所在, 其浓度的挑选极为关键重要, 不同尺寸大小的DNA片段, 需借助不同浓度的胶来予以分离, 常规PCR产物大多采用1%的凝胶, 溶胶之际务必要进行充分地煮沸, 而且还要用力摇匀, 待冷却至不烫手程度（大约60度）的时候, 再加入核酸染料, 诸如GelRed或者GoldView这种, 千万不要在高温状态下加入染料, 不然的话染料就会因分解而影响到染色的效果, 进而甚至会产生毒性, 倒胶的时候一定要小心出现了气泡, 一旦产生气泡就很难将其去除掉的, 而气泡会干扰条带的观察。
在哪一个环节最容易不慎出现差错, 是要把样品加入特定放置孔的这个环节。放置样品的孔洞需要保持完好没有遭到损坏, 加入样品的量应当适度, 要是加入量过多就会致使条带交叠在一起, 要是加入量过少那么信号就会微弱一些。运用移液器的时候手部动作需要轻柔, 移液器前端吸取液体的部件不能扎破凝胶的表面。与此同时, 还要记住在凝胶的两边分别添加marker当作参考依据, 这样子才能够精确判定目标片段的尺寸大小。进行电泳操作时所使用的缓冲液一定要没过凝胶的表面, 而且上面槽体和下面槽体里的缓冲液要保持一致, 不然的话就会使得电场不均衡, 进而导致条带发生变形了。
核酸电泳步骤中有哪些常见错误
是致使条带异常的主要缘由中的一个, 在于电压设置不恰当；电压假如过高, 那么就会致使DNA迁移速度过快, 分辨率有所降低, 甚而至会使得胶因受热而融化；要是电压过低, 就会造成电泳时间延长, 扩散风险有所增加；一般而言, 建议每厘米胶长度对应5 至 10V的电压；除此之外, 电泳时间也得把控好, 当溴酚蓝指示剂移动至胶的三分之二地方的时候就能停止了, 绝对不要让指示剂跑出胶的外部, 标点符号。
进行实验之后的结果剖析同样具有关键性, 染色倘若不充分或者曝光要是过度均会对判断产生影响, 要是出现非特异性条带, 有可能是引物二聚体或者基因组DNA受到污染, 需要对退火温度予以优化或者对模板进行纯化, 要是条带显现拖尾情况, 有可能是样品当中含有蛋白质或者多糖杂质, 建议再次对核酸进行纯化, 只有严格依照标准流程, 并且针对具体问题及时作出调整, 才能够获取清晰、准确的电泳结果。
